【kit pick up！】3時間でできる！ PCRによるDNA鑑定実験【株式会社カネカ×株式会社リバネス】
ノーベル賞受賞技術、PCR。受験にも出題される本実験の学習ニーズの高まりから、
SSHに採択された学校や、先端の実験授業・課題研究に力を入れる学校では、
サーマルサイクラーと電気泳動槽を購入し、身近な植物や昆虫を題材としたPCRによるDNA鑑定実験の事例が増えてきました。
しかし、通常のプログラムでは、試薬の分注や調製で1時間、PCR（35サイクル）で150分、
アガロースゲル電気泳動とDNAの染色で90分と合計5時間もの時間が必要で、
所要時間の長さと教える内容の多さが、本実験導入の障壁となっていました。
そこで今回、株式会社カネカにご協力いただき、
PCR反応35サイクルが60～90分で完了する酵素と、DNA電気泳動を行うことなくDNAの増幅結果が5分で確かめられる
研究者向けの実験ツール「D-QUICK（ピペットチップ型増幅判定ツール）」を既存のDNA鑑定キットに組み込むことで、
実験の所要時間が3時間に短縮され、また電気泳動を行わないためPCR実験に特化して学べるプログラムを実現しました（導入事例）。
また費用も、電気泳動槽が不要なので割安になります。
まだPCR実験を実施したことのない学校も、頻繁にPCR実験を行う学校も、ぜひ活用していただきたいキットです。
PCRでDNA鑑定に挑戦しよう！
PCRキットwith D-QUICK
価格：30,000円（税込）［1キット20名分］
＜内容物＞20名分（1人1サンプル）
テンプレート DNA、PCR プライマー、マスターミックス（※カネカ社製高速ポリメラーゼ入り）、PCR チューブ、マイクロチューブ、D-QUICK（20本）
＜キット以外で必要な物＞
マイクロピペット 20μl用（5本 各班1本）、マイクロピペット 200μl用（1本 試薬準備用）、マイクロピペット用チップ（5箱 各班1箱）、サーマルサイクラー（1台、フロート（5個）、氷（試薬冷却用）
※必要機材は、リバネスから販売およびレンタル（有料）を行っております。ご入用の際はお問い合わせください。
※サーマルサイクラーは、低価格（税抜9万8000円）かつ温度調節スピードも速いopenPCRを推奨しています（レンタルも可能です）。
※本キットに含まれるＤ-QUICKは、20本ずつの小袋包装でのお届けになります。
実験手順
- PCR実験（ 写真1）
① テンプレート DNA、PCR プライマーF、PCR プライマーR、マスターミックスを氷上で融解させる。
② テンプレート DNA、PCR プライマーF、PCR プライマーR をPCR チューブに加える。
③ ②の PCR チューブにマスターミックスを加え、ピペッティングにより溶液を均一にする。
④ サーマルサイクラーにてDNA増幅 （以下はＤＮＡ増幅プログラムの一例）。
※ネガティブコントロールについて
十分量のPCR チューブが用意されていますので、テンプレート DNA・プライマー・ポリメラーゼのいずれか、もしくはサーマルサイクラーでの処理を除いたPCR チューブを用意することで、ネガティブコントロールをとることができます。
※注意点
サンプルはできるだけ氷上に置いた状態にし、PCRチューブをつまむ際もできるだけ上部を持つようにし、サンプルが温まらないように注意してください。
- D-QUICKでDNA増幅判定（ 写真2）
① ピペットにD-QUICKを装着し、ゆっくり15回程度ピペッティングする。
② サンプル液の色の変化を確認し、「青＝DNAがある」 「無色＝DNAがない」でDNA増幅判定を行う。
【D-QUICK原理 】
D-QUICKにはフィルターが付いていて、中にはDNAに結合するAという色素と、Aを無色に変化させるBという試薬の2種類が入っています。PCR後の溶液を吸うことで、AとBが混ざります。
◎DNAがない場合
色素Aと試薬Bが結合し、溶液は無色に変化します。
◎DNAがある場合
DNAと結合した色素Aは、試薬Bと結合できず青色のまま残るため、液体が青色になります。DNAと結合しきれなかった色素Aは試薬B と結合して無色になります。